ПЦР исследование - страница №8

Данное исследование проводится для диагностики и выявления возбудителя урогенитального уреаплазмоза.

Подготовка пациента строго по инструкции с соблюдением естественного режима питания (см. комментарий).
Кал (нативный биоматериал). При одновременном заказе других исследований кала (посев, микроскопия и др.) пробу для ПЦР-исследования следует отобрать непосредственно в отдельный контейнер. Пробы отбирают с нескольких мест (не с поверхности, которая содержит естественную слизь!) в количестве не менее 2 -5 г (3 - 5 мл ) и не более 1/4 объема контейнера отбирают специальной ложкой (фиксированной на крышке контейнера) сразу после естественной дефекации (желательно на чистый лист бумаги или полиэтиленовую пленку). При отборе избегать попадание в пробы слизи, мочи, выделений из половых органов, непереваренных кусочков пищи, посторонних включений, а также химических реагентов, моющих и дезинфицирующих средств. Плотно завинтить крышку контейнера без удаления ложки. На этикетке контейнера отметить дату и время отбора пробы. Промаркировать штрих-кодом. В направлении/ заявке, по возможности, отметить задачу исследования, тип биоматериала, локализацию, предварительный диагноз, дополнительную клиническую информацию. Не вскрывать! Не замораживать! Не центрифугировать! Избегать прямого воздействия солнечного света!
Хранение и транспортировка по режиму:
(1) Оптимальный срок и условия доставки – не более 24 ч при +4 – +8°С (вертикально).
(2) При сроках доставки более 24 ч допустимо однократное замораживание и хранение первичной пробы при "-18°С" (замораживание должно быть произведено максимально быстро после взятия образца) с доставкой замороженного образца на хладоэлементе (ХЭ) при 0 – +2°С. Внимание! Повторное замораживание и размораживание не допускается!
Комментарий.
• А. Подготовка пациента.
а) Не рекомендуется брать пробу при задержке стула более 36 ч.
б) За несколько суток до применения нельзя использовать лекарственные препараты и медицинские манипуляции, влияющие на состояние желудочно-кишечного тракта (рентгеноконтрастных исследования, слабительные препараты, активированный уголь, лекарственные препараты, содержащие железо).
в) За 48 ч. до исследования рекомендуется исключить прием алкоголя и избегать изменений в пищевом режиме.
г) За 24 ч. до проведения исследования нельзя ставить клизмы.
д) Следует учитывать, что для контроля эффективности лечения по эрадикации возбудителя методом ПЦР необходим более длительный период, чем для микробиологического исследования, так как некоторое время из кишечника может выделяться ДНК мертвых микроорганизмов. Поэтому исследование рекомендуется проводить не ранее, чем через 2-3 недели после окончания лечения.
• Б. Основные принципы исключения отрицательных факторов, влияющих на ПЦР-реакции и результаты исследования при взятии биоматериала.
а) Внимание! При отборе проб для ПЦР следует тщательно избегать контаминации химическими веществами (спиртами, дезинфицирующими и моющими агентами и др.), кровью, слизью, гноем и микроорганизмами из внешней среды
б) У маленьких детей категорически нельзя отбирать пробу непосредственно с поверхности подгузника, так как содержащаяся в них целлюлоза и гели могут отрицательно сказаться на ПЦР-реакции. При необходимости возможно в таких случаях временно разместить на внутренней поверхности подгузника мягкую полиэтиленовую пленку и собрать образец кала с нее.
• В. Специальные замечания:
Для повышения чувствительности и специфичности диагностики рекомендуется проведение нескольких исследований в течение ограниченного промежутка времени.

Вирус Эпштейна – Барр является широко распространенным вирусом семейства Herpesviridae, который является причиной инфекционного мононуклеоза.

Эякулят (нативная проба). Подготовка пациента – строго по инструкции с соблюдением всех рекомендаций (см. комментарий). Пробу получают непосредственно в стерильный контейнер путем мастурбации согласно инструкции (см. комментарий). При одновременном заказе других исследований спермы (посев, микроскопия и др.) пробу для ПЦР-исследования следует отобрать непосредственно в отдельный контейнер.
Внимание! Строго избегать внешней контаминации при взятии и подготовке проб! Закрыть крышку и проверить герметичность. Промаркировать штрих-кодом. В направлении/ заявке, по возможности, отметить задачу исследования, тип биоматериала, локализацию, предварительный диагноз, дополнительную клиническую информацию. Не вскрывать! Не центрифугировать! Избегать прямого воздействия солнечного света!
Хранение и транспортировка по режиму:
(1) Оптимально доставить в срок не более 36 ч после взятия образца при +2 – +8°С.
(2) При доставке в срок более 36 ч пробу необходимо заморозить при -18°С. Хранить при -18°С не более 14 суток. Транспортировать пробу замороженной при 0 – +2°С на хладоэлементе. Внимание! Повторное замораживание и размораживание не допускается!
Комментарий.
Подготовка пациента:
а) Эякулят должен быть получен после полового воздержания (строго) – не менее 3-х и не более 7-ми суток. 2) За 12 ч до исследования нежелательно применять в области уретры и полового члена любые медицинские и гигиенические средства (мази, смазки, мыла, растворы).
б) Нельзя проводить исследование сразу после медицинских, диагностических и физиотерапевтических манипуляций на органах мочеполовой системы и малого таза (срок по согласованию с врачом).
в) Следует учитывать, что для контроля эффективности лечения по эрадикации возбудителя методом ПЦР необходим более длительный период, чем для микробиологического исследования, так как некоторое время из мочеполовых путей может выделяться ДНК мертвых микроорганизмов. Поэтому исследование рекомендуется проводить не ранее, чем через 2-3 недели после окончания лечения.
г) При заказе исследований, включающих оценку состояния микроценозов, биоматериал отбирать не ранее, чем через 2 недели после окончания приема пробиотиков.
д) Непосредственно перед взятием пробы необходимо опорожнить мочевой пузырь.
е) Прямо перед процедурой провести гигиенические мероприятия при помощи воды или стерильного физраствора.
ж) Категорически нельзя использовать при проведении процедуры в области головки полового члена любые мази и смазки (лубриканты, кремы, вазелин, слюну и др.) и любые спирты и дезинфицирующие вещества.
з) В процессе отбора проб избегать контаминации и загрязнения крышки и внутренней части контейнера.

Chlamydia trachomatis является возбудителем урогенитального хламидиоза. 

Анализ на Human papillomavirus является количественным определением ДНК ВПЧ 1 типоа - 16.
ВПЧ - это вирус папилломы человека.

Для исключения факторов, которые могут влиять на результаты исследования, необходимо придерживаться следующих правил подготовки:
• важным условием для лабораторных исследований является сдача крови натощак — 6–12-часовой период голодания. В день исследования допустимо употребление небольшого количества воды.
• за 6–12 часов до исследования следует исключить прием алкоголя, курение, прием пищи, ограничить физическую активность.
• исключить прием лекарств. Если отменить прием лекарств невозможно, необходимо проинформировать об этом лабораторию.
• детей до 5 лет перед сдачей крови желательно поить кипяченой водой (порциями до 150–200 мл в течение 30 минут).
• для грудных детей — перед сдачей крови выдержать максимально возможную паузу между кормлениями.

Подготовка пациента согласно общим (по инструкции) правилам подготовки.
Внимание! В направлении/заявке, по возможности, отметить клиническую информацию (диагноз, противоинфекционное лечение, задачу исследования), наличие прививки к возбудителю (если есть). В направлении/заявке желательно также отметить предыдущие данные диагностики (при верификации, динамических наблюдениях и мониторинге лечения).
¦ Венозная кровь – ЭДТА (отдельная от других исследований проба). Отобрать кровь строго до метки согласно инструкции. Учесть дополнительные условия для предотвращения попадания в пробу дезинфицирующих веществ и гепарина (см. комментарий)*. Перемешать плавно 7-8 раз (оборот 180°) сразу после взятия. Инкубировать 30 мин при комнатной температуре (вертикально). Промаркировать штрих-кодом.
Условия хранения и доставки:
Поместить в штатив и в отдельный пластиковый пакет или термоконтейнер. Не вскрывать крышки! Не замораживать! Не центрифугировать! Избегать воздействия прямого солнечного света!
Хранение и транспортировка по режиму:
(1) Допустимый срок и условия доставки не более 36 ч при +4 – +8°С. Избегать нагревания или охлаждения при высоких или низких температурах окружающей среды. При транспортировке в общей сумке категорически нельзя размещать данные пробы рядом с хладоэлементом! **
Условия отказа в приеме биоматериала:
Пробы крови с превышенным допустимым сроком доставки, с признаками гемолиза, с отклонениями номинального объема более 15 %, со сгустками - не могут быть использованы для исследования.
Комментарий:
• Примечания:
* а) Спирты, содержащиеся в дезинфицирующих средствах, могут негативно влиять на аналитические реакции при проведении молекулярно-биологических исследований. Поэтому следует четко соблюдать правило полного высыхания поверхности кожи перед началом венепункции и, по возможности, использовать первой дополнительную пробирку (например, для сыворотки), перед взятием пробы с ЭДТА.
б) Гепарин может негативно влиять на аналитические реакции при проведении молекулярно-биологических исследований. Поэтому желательно выполнять отдельное взятие крови от проб на кариотипирование и иммунологические исследования, для которых требуется пробирка с гепарином (зеленая маркировка), или использовать дополнительную пробирку (например, для сыворотки), перед взятием пробы с ЭДТА после пробирки с гепарином.
** Важность соблюдения температурного режима. При нагревании выше 37°С и охлаждении ниже 14-16°С происходят изменения в структуре клеточных мембран, что может привести к некорректным результатам и даже невозможности провести исследование

Анализ на Neisseria gonorrhoeae - это исследование, для диагности возбудителя гонореи, в ходе которого определяется генетический материал (ДНК) бактерий в образце.

Вирус Эпштейна – Барр является широко распространенным вирусом семейства Herpesviridae, который является причиной инфекционного мононуклеоза.

Подготовка пациента строго по инструкции.
Моча (разовая проба) (в лаборатории на нуклеиновые кислоты инфекционных возбудителей исследуется осадок нативного биоматериала). Первую утреннюю или другую (при специальных алгоритмах обследования и методах отбора) (см. комментарий) порцию мочи (не менее 20-30 мл), полученную путем естественного мочеиспускания, отобрать в стерильный контейнер. Если одновременно собирается моча для других исследований (ОАМ, микробиология, БХ и др.), то вторую порцию того же мочеиспускания нужно отобрать во второй контейнер (контейнеры заранее нужно в этом случае пронумеровать по порядку проб).
Внимание! При отборе проб мочи для ПЦР следует тщательно избегать контаминации химическими веществами, кровью, слизью, гноем и микроорганизмами из внешней среды. При подготовке – туалет наружных половых органов проводить без использования мыла и любых других гигиенических средств. Плотно завинтить крышку. Проверить герметичность. Промаркировать Штрих-кодом. Дополнительно отметить на этикетке ПЦР. Не вскрывать! Не замораживать! Не центрифугировать!
Хранение и транспортировка по режиму:
Доставка проб мочи в первичном контейнере:
(1) Оптимальный срок и условия доставки – не более 12 ч при +4 – +8°С (вертикально)*;
2) Допустимый срок и условия доставки – не более 24 ч при +4 – +8°С (вертикально).
Примечание! При невозможности доставки проб в указанные сроки, проконсультируйтесь со специалистами лаборатории о вариантах обработки первичного биоматериала (асептическое получение осадка мочи) или других способах обследования пациента.
Комментарий.
• А. Подготовка пациента. При подготовке пациента соблюдать общие правила для взятия проб мочи с учетом диагностической задачи и протокола клинического обследования пациента:
а) исследование не рекомендуется проводить ранее, чем через 6-7 дней после цистоскопии или других медицинских и диагностических манипуляций в области малого таза и половых органов.
б) Следует учитывать, что для контроля эффективности лечения по эрадикации возбудителя методом ПЦР необходим более длительный период, чем для бактериологического исследования, так как некоторое время из мочевых путей может выделяться ДНК мертвых микроорганизмов. Поэтому исследование рекомендуется проводить не ранее, чем через 2-3 недели после окончания лечения.
в) Женщинам нельзя проводить взятие пробы мочи во время менструаций.
• Взятие образца:
а) Утроенная проба мочи (первая порция) является предпочтительным биоматериалом, так как содержит максимальную концентрацию ДНК инфекционных возбудителей, локализующихся в мочеполовых путях.
б) Примеси гноя , крови, выделений их половых путей могут оказать негативное влияние на результаты ПЦР-исследования. Женщинам желательно закладывать тампон во влагалище перед сбором материала для предупреждения контаминации мочи отделяемым из влагалища. Мужчинам следит тщательно обмыть водой головку полового члена перед отбором проб мочи.
в) При отборе проб следует очень тщательно избегать контаминации пробы мочи микроорганизмами или химическими веществами из внешней среды и соприкосновения с поверхностью кожи и других предметов.
г) Кроме утренней мочи в диагностических исследованиях в урологической диагностике могут быть использованы пробы мочи, отбираемые до и после массажа простаты при топических пробах.
д) При необходимости могут быть использованы нестандартные способы получения проб мочи: перенос пробы мочи в вакуумную пробирку через переходник-пробоотборник возможен также непосредственно из стерильного одноразового контейнера-мочесборника (лежачие больные, маленькие дети) (следует строго соблюдать правила предотвращения внешней контаминации); при катетеризации взятие проб мочи непосредственно в вакуумную пробирку возможно через резиновую заглушку или канюлю системы мочесборника при помощи двухсторонней иглы или переходников, используемых при взятии крови вакуумным способом.