Выявление возбудителей бактериальных кишечных инфекций в Крыму

Подготовка пациента строго по инструкции с соблюдением естественного режима питания (см. комментарий).
Кал (нативный биоматериал). При одновременном заказе других исследований кала (посев, микроскопия и др.) пробу для ПЦР-исследования следует отобрать непосредственно в отдельный контейнер. Пробы отбирают с нескольких мест (не с поверхности, которая содержит естественную слизь!) в количестве не менее 2 -5 г (3 - 5 мл ) и не более 1/4 объема контейнера отбирают специальной ложкой (фиксированной на крышке контейнера) сразу после естественной дефекации (желательно на чистый лист бумаги или полиэтиленовую пленку). При отборе избегать попадание в пробы слизи, мочи, выделений из половых органов, непереваренных кусочков пищи, посторонних включений, а также химических реагентов, моющих и дезинфицирующих средств. Плотно завинтить крышку контейнера без удаления ложки. На этикетке контейнера отметить дату и время отбора пробы. Промаркировать штрих-кодом. В направлении/ заявке, по возможности, отметить задачу исследования, тип биоматериала, локализацию, предварительный диагноз, дополнительную клиническую информацию. Не вскрывать! Не замораживать! Не центрифугировать! Избегать прямого воздействия солнечного света!
Хранение и транспортировка по режиму:
(1) Оптимальный срок и условия доставки – не более 24 ч при +4 – +8°С (вертикально).
(2) При сроках доставки более 24 ч допустимо однократное замораживание и хранение первичной пробы при "-18°С" (замораживание должно быть произведено максимально быстро после взятия образца) с доставкой замороженного образца на хладоэлементе (ХЭ) при 0 – +2°С. Внимание! Повторное замораживание и размораживание не допускается!
Комментарий.
• А. Подготовка пациента.
а) Не рекомендуется брать пробу при задержке стула более 36 ч.
б) За несколько суток до применения нельзя использовать лекарственные препараты и медицинские манипуляции, влияющие на состояние желудочно-кишечного тракта (рентгеноконтрастных исследования, слабительные препараты, активированный уголь, лекарственные препараты, содержащие железо).
в) За 48 ч. до исследования рекомендуется исключить прием алкоголя и избегать изменений в пищевом режиме.
г) За 24 ч. до проведения исследования нельзя ставить клизмы.
д) Следует учитывать, что для контроля эффективности лечения по эрадикации возбудителя методом ПЦР необходим более длительный период, чем для микробиологического исследования, так как некоторое время из кишечника может выделяться ДНК мертвых микроорганизмов. Поэтому исследование рекомендуется проводить не ранее, чем через 2-3 недели после окончания лечения.
• Б. Основные принципы исключения отрицательных факторов, влияющих на ПЦР-реакции и результаты исследования при взятии биоматериала.
а) Внимание! При отборе проб для ПЦР следует тщательно избегать контаминации химическими веществами (спиртами, дезинфицирующими и моющими агентами и др.), кровью, слизью, гноем и микроорганизмами из внешней среды
б) У маленьких детей категорически нельзя отбирать пробу непосредственно с поверхности подгузника, так как содержащаяся в них целлюлоза и гели могут отрицательно сказаться на ПЦР-реакции. При необходимости возможно в таких случаях временно разместить на внутренней поверхности подгузника мягкую полиэтиленовую пленку и собрать образец кала с нее.
• В. Специальные замечания:
Для повышения чувствительности и специфичности диагностики рекомендуется проведение нескольких исследований в течение ограниченного промежутка времени.
Состав:
ДНК Shigella
ДНК Salmonella
ДНК Campylobacter
ДНК Adenovirus